肝卵圆细胞

摘要： 背景:CTLA4.FasL可有效抑制同种反应性T淋巴细胞及自身反应性T淋巴细胞,但CTLA4.FasL在异种肝卵圆细胞经脾移植中对异种反应性T淋巴细胞的抑制作用还不明确.目的:研究CTLA4.FasL对异种反应性淋巴细胞增殖的作用,监测CTLA4.FasL修饰的小鼠肝卵圆细胞(CTLA4.FasL-肝卵圆细胞)在大鼠脾脏内的存活与定植.方法:①于小鼠肝卵圆细胞悬液中,加入携带CTLA4.FasL融合基因的重组慢病毒载体Lv/CTLA4.FasL和聚凝胺进行感染,以未感染慢病毒的肝卵圆细胞和感染空白慢病毒-肝卵圆细胞为对照;在荧光显微镜下观察肝卵圆细胞的活力和红色荧光蛋白慢病毒载体的表达;②对行2/3肝切除的SD大鼠分别经脾移植CTLA4.FasL-肝卵圆细胞、空白慢病毒-肝卵圆细胞、肝卵圆细胞和PBS(不含肝卵圆细胞),分别于肝切除术后1,5,14和21 d,采用ELISA法测定大鼠血清CTLA4.FasL浓度,取受体大鼠脾脏进行CK-19的免疫组化检测;③以C57BL/6小鼠淋巴细胞作为刺激细胞,以SD大鼠淋巴细胞作为反应细胞;在混合淋巴细胞反应中,分别接种CTLA4.FasL-肝卵圆细胞,空白慢病毒-肝卵圆细胞及肝卵圆细胞,或分别加入CTLA4.FasL-肝卵圆细胞(质量浓度分为10,50和100μg/L)、空白慢病毒-肝卵圆细胞及肝卵圆细胞培养上清液,培养96 h后,用5-Brdu法测定各组大鼠淋巴细胞的增殖情况.结果 与结论:①在异种混合淋巴细胞培养体系中,CTLA4.FasL-肝卵圆细胞及培养上清均能有效抑制大鼠淋巴细胞的增殖;②CTLA4.FasL-肝卵圆细胞移植受体大鼠的脾脏淋巴细胞对小鼠淋巴细胞低免疫应答,而空白慢病毒-肝卵圆细胞和肝卵圆细胞移植受体大鼠来源的脾细胞则表现出强应答;③CTLA4.FasL-肝卵圆细胞组移植后21 d大鼠脾脏实质内可见CK-19阳性细胞,而在PBS组、肝卵圆细胞组和空白慢病毒-肝卵圆细胞组术后21 d未见CK-19阳性细胞;④结果说明,CTLA4.FasL可有效抑制异种反应性淋巴细胞的增殖,促进小鼠肝卵圆细胞在大鼠脾实质内的存活及定植.

摘要： cqvip:肝卵圆细胞(hepatic oval cell,HOC)是一种肝脏内的多能干细胞,正常状态下具有向肝细胞和胆管细胞分化的潜能[1-2]。有研究发现,HOC易受某些致癌因素影响异常增殖恶性转化成为致癌靶点,提示HOC在肝硬化转肝癌的过程中发挥重要作用[3]。探究调控HOC的恶性转化作用的机制成为当前研究肝癌防治机制的热点;在阻止或逆转HOC恶性转化中的作用中,多种中药及其活性成分发挥了有效作用。

摘要： 肝卵圆细胞(Hepatic oval cel s,HOC)是肝的干细胞,在严重肝损伤等情况下被大量激活,可分化为成熟的肝细胞和胆管上皮细胞(Biliary epithelial cel s,BEC).HOC具有干细胞的自我更新、克隆分化的能力,使其在肝脏疾病和胆道疾病治疗的研究中具有重要意义.HOC的增殖、分化调控机制主要分为细胞外调控机制(细胞因子和细胞外基质的调控)、细胞内调控机制(转录因子、信号通路的调控)、自噬系统和其他的调控机制.

摘要： 肝卵圆细胞是在肝损伤大鼠模型肝内发现的一类细胞,被认为是多能肝干细胞的子代细胞,也被认为是一种肝干细胞.大量研究认为肝卵圆细胞能够在肝脏严重受损、肝细胞增殖受抑制的情况下被活化,通过增殖、分化而形成成熟的肝细胞和胆管上皮细胞,重建受损的肝组织.随着生物技术的发展,肝卵圆细胞诱导分化被广泛发掘,因此,其必将在治疗肝脏疾病方面具有前景,而且在治疗胆道疾病,尤其是在修复胆道损伤及胆道黏膜上皮的完整性上成为可能.

摘要： 目的:探讨信号转导与转录活化因子3(STAT3)对恶性转化的肝卵圆细胞WB-F344的作用及其机制.方法:用N-甲基-N'-亚硝基胍(MNNG)和过氧化氢(H2O2)制备WB-F344肝卵圆细胞恶性转化模型,通过流式细胞术检测非整倍体细胞数量、Western blot检测甲胎蛋白(AFP)表达水平和软琼脂集落形成实验测定克隆形成率评价细胞的恶性转化,用葡萄糖氧化酶法检测细胞葡萄糖水平,用比色法检测细胞乳酸水平,用Western blot实验检测STAT3、p-STAT3和葡萄糖转运蛋白2(GLUT2)的蛋白水平,并通过WST-1法、活细胞计数法、流式细胞术测定细胞周期的S期细胞比例和增殖指数,以及Western blot检测增殖细胞核抗原(PCNA)表达水平来评价细胞增殖能力.结果:与对照组比较,转化的肝卵圆细胞克隆形成率增加(P<0.05),非整倍体细胞增多(P<0.01),AFP表达增强(P<0.05);葡萄糖消耗增多(P<0.05),乳酸产生增多(P<0.01); GLUT2表达上调(P<0.01),STAT3的活化增强(P<0.01);细胞活力增强(P<0.01),S期细胞比例增多(P<0.01),细胞增殖指数增加(P<0.01), PCNA表达上调(P<0.01).与模型组比较,STAT3的抑制剂stattic明显抑制恶性转化的肝卵圆细胞的克隆形成(P<0.01),促使非整倍体细胞显著减少(P<0.01)和AFP表达降低(P<0.05);减少葡萄糖消耗(P<0.05)和乳酸的产生(P<0.01);降低GLUT2(P<0.01)的表达水平;抑制恶性转化的肝卵圆细胞活力(P<0.05),降低S期细胞比例(P<0.01)、细胞增殖指数(P<0.01)和PCNA表达水平(P<0.05).结论:STAT3可能通过上调GLUT2表达而加快葡萄糖摄取、增强Warburg效应并促进细胞增殖,从而促进肝卵圆细胞的恶性转化.%AIM:To investigate the influence of signal transducer and activator of transcription 3(STAT3)on Warburg effect in the malignant transformation of WB-F344 rat hepatic oval cells.METHODS:The WB-F344 cells were treated with N-methyl-N'-nitro-N-nitrosoguanidine(MNNG)and hydrogen peroxide(H2O2)to induce the malignant trans-formation.Evaluation of the transformed cells were measured by the soft agar colony formation assay and DNA aneuploidy with flow cytometry.The levels of glucose and lactate in the culture medium of the cells were detected by chromatography. The protein levels of alpha-fetoprotein(AFP),STAT3,p-STAT3 and glucose transporter 2(GLUT2)in the cells were ex-amined by Western blot analysis.The cell proliferation were evaluated by WST-1 assay,viable cell counting,measuring the S-phase fraction(SPF)and proliferation index(PI)using the data from flow cytometry analysis,and detecting proliferating cell nuclear antigen(PCNA)protein expression by Western blot.RESULTS:Compared with the control cells,the forma-tion of colonies in soft agar(P<0.05)and DNA aneuploidy(P<0.01)were elevated in transformed cells,and the ex-pression level of AFP was also augmented(P<0.05).The increases in the level of both glucose consumption(P<0.05) and lactate production(P<0.01)show that Warburg effect was enhanced in transformed cells.Meanwhile, the protein levels of GLUT2(P<0.01)and p-STAT3(P<0.01)in transformed cells were higher than those in the control cells.The cell proliferation parameters including SPF(P<0.01),PI(P<0.01), viable cell number and PCNA expression(P<0.01)in transformed cells were also elevated as compared with the control cells.Interestingly, stattic, an inhibitor of STAT3 activation,resulted in declines in glucose consumption(P<0.05)and lactate production(P<0.01)in the trans-formed cells.In addition,compared with transformed cells,formation of colonies in soft agar(P<0.01),DNA aneuploidy (P<0.01),AFP(P<0.05), GLUT2(P<0.05), and cell proliferation parameters including SPF(P<0.01), PI (P<0.01),viable cell number(P<0.05)and PCNA expression(P<0.05)were also decreased following stattic treat-ment in transformed cells.CONCLUSION:STAT3 promotes Warburg effect and cell proliferation probably by upregula-ting GLUT2 expression in the malignant transformation of hepatic oval cells.

摘要： 肝癌前病变与肝癌的关系密切.肝癌前病变与肝卵圆细胞上皮间质转化的相关性研究对早期肝癌的防治具有重要意义.本文重点综述肝癌前病变相关的分子生物学研究内容、肝卵圆细胞上皮间质转化的研究基础以及两者的相关性研究进展情况.

摘要： 目的 探讨microRNA-21(miR-21)在TGF-β1引起的肝卵圆细胞(hepatic oval cell,HOC)上皮间质转化(epithelial mesenchymal transition,EMT)中的作用.方法 体外培养大鼠肝卵圆细胞,用10 ng/mL TGF-β1刺激HOC 1、3、5、7 d后,Western blotting检测EMT相关蛋白(E-cadherin、N-cadherin和Vi-mentin)表达情况;用10 ng/mL TGF-β1刺激HOC 5 d后,实时荧光定量PCR检测miR-21的表达情况;分别用miR-21增强和抑制慢病毒转染HOC构建稳定的细胞株,PCR检测miR-21的表达情况;接着用TGF-β1刺激miR-21抑制慢病毒转染的HOC 5 d,Western blotting检测E-cadherin、N-cadherin和Vimentin的表达;用miR-21增强慢病毒转染HOC后,Western blotting检测E-cadherin、N-cadherin和Vimentin的表达.结果 TGF-β1刺激HOC 1、3、5、7 d后,E-cadherin逐渐减低,N-cadherin和Vimentin逐渐升高.TGF-β1刺激HOC 5 d后miR-21的表达增强了4.32倍.分别用增强和抑制慢病毒转染HOC后,miR-21的表达增强了3.82倍和抑制了0.22倍.下调miR-21表达后,TGF-β1致HOC的EMT作用减弱.miR-21过表达后,HOC发生了EMT.结论 抑制miR-21的表达可以减少TGF-β1引起的HOC的EMT作用,从而减轻肝纤维化.%Objective To investigate the role of microRNA-21 (miR-21) in the epithelial mesenchymal transition (EMT) of hepatic oval cells (HOC) induced by TGF-β1. Methods Hepatic oval cells were cultured in vitro. The EMT-related proteins including E-cadherin, N-cadherin and Vimentin were detected by Western blotting after stimulation with 10 ng/mL TGF-β1 for 1, 3, 5 and 7 d. The expression of miR-21 was detected by real-time quantitative PCR with 10 ng/mL TGF-β1 for 5 d. The stable cell lines were constructed with enhanced and inhibited lentivirus transfection respectively and the expression of miR-21 was detected by PCR. The expression of E-cadherin, N-cadherin and Vimentin was detected by Western blotting after TGF-β1 stimulation on hepatic oval cells with miR-21 inhibited lentivirus transfection for 5 d. The expression of E-cadherin, N-cadherin and Vimentin was detected by Western blotting on hepatic oval cells with miR-21 enhanced lentivirus transfection. Results After the hepatic oval cells were stimulated by TGF-β1 for 1, 3, 5 and 7 d, the expression of E-cadherin decreased gradually, accompanying with gradually increased expression of N-cadherin and Vimentin. The expression of miR-21 in hepatic oval cells increased by 4.32 times after TGF-β1 stimulation for 5 d. The expression of miR-21 was enhanced by 3.82 times and decreased by 0.22 times respectively after the enhancement and inhibition of lentivirus transfection on hepatic oval cells. The down-regulated expression of miR-21 alleviated the EMT effect induced by TGF-β1on hepatic oval cells. After over-expression of miR-21, epithelial mesenchymal transition occurred in hepatic oval cells. Conclusion The inhibited expression of miR-21 can reduce the EMT effect induced by TGF-β1stimulation on HOC, thereby reducing liver fibrosis.

摘要： 目的：用D-gal建立大鼠急性肝损伤模型,观察肝损伤后再生过程中肝卵圆细胞的增殖和迁延.方法：建立大鼠急性肝损伤模型,于第1、3、7和14天分别取肝组织,分别行病理、免疫组织化学,观察卵圆细胞的分布迁移情况,并取第7天肝组织进行组织电镜观察汇管区新增生细胞超微结构.结果：病理切片显示肝细胞变性坏死程度以第7天和第14天为主,出现新增生的细胞.免疫组化示随时间阳性细胞明显增多,分布于汇管区,并向小叶中心迁移,形成大量的胆小管,并有部分向坏死区迁移.透射电镜有新生内源性细胞,小于成熟的肝细胞,细胞器较少,有细胞紧密连接,以数个细胞排列成小胆管,与免疫组化一致.结论：在大鼠急性肝损伤时HOC被活化、增殖,并向肝小叶中心迁移,全程参与了肝再生过程.

摘要： 本发明公开了一种成体大鼠肝脏卵圆细胞系rHOC，该细胞系已于2010年7月23日保存在中国微生物菌种保藏管理委员会普通微生物中心(CGMCC)，其保藏登记编号为CGMCC No.4057。所述细胞具有以下生物学特性：细胞呈典型上皮细胞形态，具有较强的增殖能力但生长仍具有接触抑制与密度抑制现象，表达的肝脏前体细胞标志物：肝脏卵圆细胞标志物(OV-6)、Notch配基Delta样蛋白(Dlk)、甲胎蛋白(AFP)、白蛋白(ALB)和细胞角蛋白19(CK19)；细胞连续传代培养48个月已传至100代，仍然保持上述形态特点、生长和增殖特性以及免疫表型，其特性稳定、成分均一，是良好的肝脏前体细胞研究模型。

摘要： 本发明公开了一种成体大鼠肝脏卵圆细胞系rHOC，该细胞系已于2010年7月23日保存在中国微生物菌种保藏管理委员会普通微生物中心(CGMCC)，其保藏登记编号为CGMCC No.4057。所述细胞具有以下生物学特性：细胞呈典型上皮细胞形态，具有较强的增殖能力但生长仍具有接触抑制与密度抑制现象，表达的肝脏前体细胞标志物：肝脏卵圆细胞标志物(OV-6)、Notch配基Delta样蛋白(Dlk)、甲胎蛋白(AFP)、白蛋白(ALB)和细胞角蛋白19(CK19)；细胞连续传代培养48个月已传至100代，仍然保持上述形态特点、生长和增殖特性以及免疫表型，其特性稳定、成分均一，是良好的肝脏前体细胞研究模型。

摘要： 本发明涉及一种移植了肿瘤细胞的含胚卵模型用于研究免疫治疗分子的抗癌有效性或筛选免疫治疗分子的用途，其中不存在除移植卵中的免疫效应细胞以外的免疫效应细胞。

摘要： 本发明提供了一个高效的肝卵圆细胞新诱导模型。该模型中利用HGF和EGF显著性诱导胚胎干细胞源性卵圆细胞的生成，整个诱导方法较简便，诱导周期也很短。利用本发明的肝卵圆细胞诱导模型，利用很少的胚胎干细胞种源便可诱导生成足够多的、能满足临床需要的肝卵圆细胞，进而可用于肝卵圆细胞移植、肝脏组织工程学等临床范畴，对各种原因所致肝功能衰竭、肝代谢疾病等起到辅助支持治疗或治愈疾病的功用。

摘要： 本发明涉及一种诱导肝卵圆细胞系在肝脏去细胞生物支架上形成功能性类肝样器官组织的方法，属于生物技术领域，该方法中主要将肝卵圆细胞系(HOCL)作为种子干细胞，植入具有生物活性的再生期肝脏去细胞生物支架(R‑DLS)中，根据体外模拟体类肝脏器官发育微环境理念，加入能诱导HOCL肝向功能分化和重建功能性肝脏器官组织结构的条件培养液，在体外3D培养体系中构建功能性类肝样器官组织。该方法中在R‑DLS中经体外3D培养体系的HOCL在2‑24h时就显示了其向功能肝细胞分化，21天即可形成类肝样器官组织，采用本专利方法构建的“新肝脏”对作为肝移植供体和治疗ESLD具有重要临床转换价值。

摘要： 本发明公开了一种诱导肝卵圆细胞向胆管细胞分化的方法及其专用培养基。该培养基是在RPMI1640培养基的基础上添加了3％(V/V)胎牛血清，2％(V/V)B27，0.2mol/L L-谷氨酰胺，1％(V/V)青-链霉素。该诱导分化方法包括以下步骤：1)将表皮形态发生蛋白基因导入进PT67细胞，得到高表达活性表皮形态发生蛋白的PT67细胞；2)将高表达活性表皮形态发生蛋白的PT67细胞作为饲养层并进行生长阻滞处理后接种WB-F344细胞，用上述体外诱导肝卵圆细胞分化为胆管细胞的专用培养基在37°C、5％C02下共培养，得到胆管细胞。本发明提供了一条获得胆管细胞的新途径，应用前景广阔。

摘要： 本发明公开了一种诱导肝卵圆细胞向胆管细胞分化的方法及其专用培养基。该培养基是在RPMI1640培养基的基础上添加了1－6％胎牛血清，1－3％B27和0.05－0.15％青－链霉素。该诱导分化方法包括以下步骤：1)将RhoA基因突变体导入卵圆细胞WB－F344，得到高表达RhoA基因活性突变体的WB－F344细胞；2)将高表达活性RhoA基因突变体的WB－F344细胞接种于上述体外诱导肝卵圆细胞分化为胆管细胞的专用培养基中，在37°C、5％CO2下培养，得到胆管细胞。本发明提供了一条获得胆管细胞的新途径，应用前景广阔。

摘要： 本发明提供了一个高效的肝卵圆细胞新诱导模型。该模型中利用HGF和EGF显著性诱导胚胎干细胞源性卵圆细胞的生成，整个诱导方法较简便，诱导周期也很短。利用本发明的肝卵圆细胞诱导模型，利用很少的胚胎干细胞种源便可诱导生成足够多的、能满足临床需要的肝卵圆细胞，进而可用于肝卵圆细胞移植、肝脏组织工程学等临床范畴，对各种原因所致肝功能衰竭、肝代谢疾病等起到辅助支持治疗或治愈疾病的功用。

摘要： 本发明涉及癌症动物模型建立技术领域，具体涉及一种基于肝卵圆细胞恶性化的原发性小鼠肝癌模型及其建立方法和应用。建立方法包括以下步骤：使用原癌基因转化肝卵圆细胞，获得肝癌干细胞；将肝癌干细胞原位移植到受体小鼠的肝脏，获得原发性小鼠肝癌模型；所述受体小鼠是经过X射线辐照处理的野生型小鼠。本方案针对现有原发性肝癌动物模型的局限，建立了模拟原发性肝癌整个发生发展自然过程的新型原发性模型，从而可以精确研究特定基因在原发性肝癌发生发展中的作用及机制，验证该基因是否能够作为一个有效治疗靶点。利用本方案的模型可以筛选潜在原发性肝癌治疗新靶标以及新药物，为研究开发出新型的治疗原发性肝癌的药物或者治疗方法创造条件。

摘要： 本发明涉及癌细胞培养技术领域，具体涉及一种肝卵圆细胞永生化培养基及其制备方法和应用。肝卵圆细胞永生化培养基，包括基础成分和添加因子；所述添加因子包括肝细胞生长因子、表皮生长因子和白血病抑制因子。肝细胞生长因子、表皮生长因子和白血病抑制因子三者连用，可有效促进小鼠肝卵圆细胞的永生化进程，肝卵圆细胞在离体条件下至少可以保持8周以上的细胞增殖活性，且未见细胞分化，细胞呈圆形或卵圆形。本方案的培养基可使肝卵圆细胞具有可以多次传代的特性，可应用于保持肝卵圆细胞增殖活性和抑制肝卵圆细胞分化的实践操作中，可为研究人员提供更多的细胞资源。