作为METAP2(2型蛋氨酸氨肽酶)抑制剂的吡唑并二氮杂萘二酮衍生物

本发明涉及吡唑并二氮杂萘二酮衍生物、其制备及其治疗用途。

本发明化合物为2型蛋氨酸氨肽酶(MetAP2)的可逆和选择性抑制剂。

MetAP2为多肽代谢中涉及的普遍存在的基于胞质的金属蛋白酶。

MetAP2催化位于由细胞新合成的蛋白质的N末端蛋氨酸残基的裂解 (BradshawR.A.等,TIBS,1998,23,263-267)。N端蛋氨酸残基的裂解是许多蛋 白质和多肽成熟中的重要步骤。其能够使细胞继续通常的翻译后修饰(肉豆 蔻酰化，棕榈酰化等)，然后降解所述同一蛋白质。然而，MetAP2仅可在第 二残基尺寸更小且不带电的条件下裂解该残基。

当活性位点含有两个二价金属原子例如Co(II)或Mn(II)时MetAP2为活 性的(LiX.,ChangY.H.,Biochem.Biophys.Res.Commun.227,1996,152-159)。 此外，研究已使得可确定人类MetAP2极有可能使用锰作为生理学金属离子 (WangJ.等,Biochemistry2003,42,5035-5042)。

MetAP2的另一功能是防止蛋白翻译因子eIF2(真核起始因子2)磷酸化 (Datta等,1988；Li和Chang,1996)。已显示eIF2的磷酸化导致真核细胞中 全部蛋白质合成受到抑制。通过结合至蛋白翻译因子(elF2)，MetAP2保护α 亚基免受抑制性磷酸化(Datta,2000；Kimball,1999；Pestova等,2001)。然而， MetAP2活性抑制剂不影响MetAP2阻断elF2磷酸化的能力(Griffith,1997)， 这表明两个功能是独立的。

存在MetAP2同工型：MetAP1。这两种同工型区别在于一个MetAP2 的C末端内存在约60个残基的额外螺旋结构域的。真核细胞具有两种形式。 这两种形式的突变对于真核细胞是致命的。该结果加强了对于识别对 MetAP2具有选择性的抑制剂的兴趣。另一方面，当仅有一种同工型突变时， 观察到生长减少(LiX.和ChangY.H.,Proc.Natl.Acad.Sci.1995,92, 12357-12361)。这些结果证实了蛋氨酸氨肽酶(MAP)功能对于细胞生长是必 需的并且该活性不能通过一个独立于MetAP的途径来接替。

同样存在两种类型的MetAP2抑制剂：可逆抑制剂和不可逆抑制剂。某 些已知的不可逆抑制剂为烟曲霉素(fumagillin)、TNP-470和卵假散囊菌素 (ovalicin)。在分子水平上，正如烟曲霉素和卵假散囊菌素，TNP-470共价且 不可逆结合至MetAP2(GriffithE.C.等,Chem.Biol.1997,4,461-471)。

MetAP2已被确认为是衍生自烟曲霉素的抗血管生成剂家族(描述为有 效不可逆MetAP2抑制剂)的靶标。MetAP2抑制和由此产生的内皮细胞增殖 和新生血管形成的抑制之间的因果联系已清晰地建立(GriffithE.C.等,Chem. Biol.1998,95,15183-15188)。

在细胞水平上，MetAP2的靶标蛋白质目前仍鲜为人知。其中之一为甘 油醛-3-磷酸酯脱氢酶。已在用TNP-470处理内皮细胞期间观察到该酶合成 中的一个缺陷。近期的研究支持以下的假设：TNP-470的抗-MetAP2活性为 其抗血管生成活性的来源。

已显示不可逆MetAP2抑制剂在肺和肝纤维化治疗中发挥作用。纤维化 是组织损伤之后伤痕组织异常形成并导致受侵袭器官的慢性和进行性损伤， 其可导致受侵袭器官的严重功能紊乱。可存在许多纤维化原因，但大多数情 况下，病痛原因不明并且损伤难以检测。活化的成纤维细胞和肌成纤维细胞 的聚集体发展，其构成了大量纤维化病灶的开始。当形成损伤，它们是不可 逆且不可消除的。因此，治疗针对的是疾病进展的减缓和改善症状。在这种 情况下，不可逆MetAP2抑制剂已在体内模型上显示了肺和肝纤维化的减少。 然而，已证明了这些不可逆抑制剂的显著毒性(KrugerE.A.,Exp.Opinion Invest.Drugs,2000；Satchi-FainaroR.等,NatureMedicine,2004)。

本发明提供了式(I)化合物

其中：

X表示CH或氮原子，

Y表示CH或氮原子，其中X或Y为氮原子，

R₁表示未经取代或经一个或多个卤素原子取代的(C1-C4)烷基，

R₂表示芳基或杂芳基，其未经取代或经一个或多个独立地选自以下的取 代基取代：

-卤素原子，

-(C1-C4)烷基，其中烷基为未经取代的或经一个或多个独立地选自以 下的取代基取代：卤素原子、杂环基、(C1-C4)烷氧基或羟基或NHR₃

-O-R₄

-(CO)NR₅R_5’

-未经取代或经一个或多个(C1-C4)烷基取代的杂环基

-环烷基

-氰基

-NR₆R_6’

-SO₂NR₆R_6’

-NHSO₂R₇

-NH(CO)R₇

-(CO)R₈，和

-杂芳基，

R₃表示(C1-C4)烷基或环烷基，

R₄表示氢原子或(C1-C4)烷基，其中烷基为未经取代或经一个或多个卤 素原子或杂环基取代，

R₅和R_5’独立地表示氢原子、(C1-C4)烷基或芳基，

R₆和R_6’独立地表示氢原子或(C1-C4)烷基，

R₇表示(C1-C4)烷基，和

R₈表示(C1-C4)烷基、(C1-C4)烷氧基、环烷基或羟基。

式(I)化合物可包含一个或多个不对称碳原子。因此，它们可以对映异构 体或非对映异构体的形式存在。这些对映异构体和非对映异构体，及其混合 物，包括外消旋混合物，形成了本发明的一部分。

式(I)化合物还可以互变异构体形式存在并且为本发明的一部分。

式(I)化合物可以碱或与酸或碱的加成盐(特别是药用盐)的形式存在。这 些盐形成了本发明的一部分。

这些盐有利地以药用酸诸如盐酸制备，但是用于例如纯化或分离式(I) 化合物的其他酸的盐也形成了本发明的一部分。

在本发明的上下文中，某些术语具有以下定义：

-卤素原子：氟、氯、溴或碘原子；

-烷基：直链或支链饱和脂族基团。实例包括甲基、乙基、丙基、异 丙基等；

-环烷基：环状(C3-C6)烷基。实例包括环丙基、环丁基、环戊基、环 己基，等；

-烷氧基：-O-烷基，其中烷基如上定义。烷氧基的实例包括甲氧基、 乙氧基、异丙氧基，等；

-氰基：基团CN；

-羟基：基团OH；

-芳基：包含5至10个碳原子的环状芳香族基团。芳基的实例包括苯 基；

-杂芳基：包含5至10个碳原子并包含1至5个杂原子诸如氮和氧的 单环芳香族或双环芳香族基团。杂芳基的实例包括吡啶基、2-吡啶基、4-吡 啶基、3-吡啶基、吡唑基、嘧啶基和喹啉基；

-杂环基：未经取代的或桥接的环状烷基，其包含4至9个成环原子， 其中1或2个为杂原子，诸如氧或氮。杂环基的实例包括吡咯烷基、哌嗪基、 哌啶基、吗啉基和二氮杂环庚烷基。

在作为本发明主题的式(I)化合物中，第一组化合物包括其中X表示氮 原子且Y表示CH的化合物。

在作为本发明主题的式(I)化合物中，第二组化合物包括其中X表示CH 且Y表示氮原子的化合物。

在作为本发明主题的化合物中，第三组化合物包括其中R1表示未经取 代或经一个或多个氟原子取代的(C1-C4)烷基(更优选三氟乙基)的式(I)化合 物。

在作为本发明主题的式(I)化合物中，第四组化合物包括其中R2表示未 经取代或经一个或多个独立地选自以下的取代基取代的芳基的化合物：

-卤素原子

-(C₁-C₄)烷基，其中烷基为未经取代或经一个或多个独立地选自以下 的取代基取代：卤素原子、杂环基、(C₁-C₄)烷氧基或羟基或NHR₃

-羟基

-O-R₄，

-(CO)NHR₅，

-未经取代或经(C₁-C₄)烷基取代的杂环基

-NR₆R_6’，

-SO₂NR₆R_6’

-NHSO₂R₇，

-NH(CO)R₇，

-(CO)R₈，和

-杂芳基。

在第四组化合物中，可提及其中R2表示苯基的式(I)化合物。

在作为本发明主题的式(I)化合物中，第五组化合物包括其中R2表示未 经取代或经一个或多个独立地选自以下的取代基取代的杂芳基的化合物：

-卤素原子

-(C₁-C₄)烷基，其中烷基为未经取代或经一个或多个独立地选自以下 的取代基取代：卤素原子、杂环基、(C₁-C₄)烷氧基或羟基或NHR₃，

-O-R₄

-未经取代或经(C₁-C₄)烷基取代的杂环基

-环烷基

-氰基

-NR₆R_6’，和

-(CO)R₈。

在第五组化合物中，可提及其中R2表示包含1或2个氮原子的杂芳基 的式(I)化合物。

在后一组化合物中，可提及其中R2表示吡啶基、嘧啶基或喹啉基的式 (I)化合物。

在作为本发明主题的式(I)化合物中，可特别提及呈其碱、对映异构体、 非对映异构体、互变异构体包括外消旋混合物以及与酸的加成盐的形式的下 列化合物：

化合物编号1：7-(2-氯-吡啶-3-基)-5-(2,2,2-三氟-乙基)-1,5-二氢-吡唑并 [4,3-c][1,6]二氮杂萘-4-酮

化合物编号2：7-吡啶-2-基-5-(2,2,2-三氟-乙基)-1,5-二氢-吡唑并 [4,3-c][1,6]二氮杂萘-4-酮

化合物编号3：7-[2-(4-甲基-哌嗪-1-基)-吡啶-4-基]-5-(2,2,2-三氟-乙 基)-1,5-二氢-吡唑并[4,3-c][1,6]二氮杂萘-4-酮

化合物编号4：7-(4-氟-苯基)-5-(2,2,2-三氟-乙基)-1,5-二氢-吡唑并 [4,3-c][1,6]二氮杂萘-4-酮

化合物编号5：7-邻甲苯基-5-(2,2,2-三氟-乙基)-1,5-二氢-吡唑并 [4,3-c][1,6]二氮杂萘-4-酮

化合物编号6：5-(2,2,2-三氟-乙基)-7-(2-三氟甲基-苯基)-1,5-二氢-吡唑 并[4,3-c][1,6]二氮杂萘-4-酮

化合物编号7：7-(2-氟-苯基)-5-(2,2,2-三氟-乙基)-1,5-二氢-吡唑并 [4,3-c][1,6]二氮杂萘-4-酮

化合物编号8：7-吡啶-4-基-5-(2,2,2-三氟-乙基)-1,5-二氢-吡唑并 [4,3-c][1,6]二氮杂萘-4-酮

化合物编号9：7-喹啉-8-基-5-(2,2,2-三氟-乙基)-1,5-二氢-吡唑并 [4,3-c][1,6]二氮杂萘-4-酮

化合物编号10：5-(2,2,2-三氟-乙基)-7-(2-三氟甲氧基-苯基)-1,5-二氢- 吡唑并[4,3-c][1,6]二氮杂萘-4-酮

化合物编号11：2-[4-氧代-5-(2,2,2-三氟-乙基)-4,5-二氢-1H-吡唑并 [4,3-c][1,6]二氮杂萘-7-基]-苯甲酰胺

化合物编号12：7-(4-吗啉-4-基-苯基)-5-(2,2,2-三氟-乙基)-1,5-二氢-吡 唑并[4,3-c][1,6]二氮杂萘-4-酮

化合物编号13：7-(6-氨基-吡啶-3-基)-5-(2,2,2-三氟-乙基)-1,5-二氢-吡 唑并[4,3-c][1,6]二氮杂萘-4-酮

化合物编号14：7-(2-氟-4-甲氧基-苯基)-5-(2,2,2-三氟-乙基)-1,5-二氢- 吡唑并[4,3-c][1,6]二氮杂萘-4-酮

化合物编号15：4-[4-氧代-5-(2,2,2-三氟-乙基)-4,5-二氢-1H-吡唑并 [4,3-c][1,6]二氮杂萘-7-基]-N-苯基-苯甲酰胺

化合物编号16：2-氟-N-甲基-5-[4-氧代-5-(2,2,2-三氟-乙基)-4,5-二氢 -1H-吡唑并[4,3-c][1,6]二氮杂萘-7-基]-苯甲酰胺

化合物编号17：7-(2-吗啉-4-基甲基-苯基)-5-(2,2,2-三氟-乙基)-1,5-二 氢-吡唑并[4,3-c][1,6]二氮杂萘-4-酮

化合物编号18：7-(2-乙氧基甲基-苯基)-5-(2,2,2-三氟-乙基)-1,5-二氢- 吡唑并[4,3-c][1,6]二氮杂萘-4-酮

化合物编号19：N-甲基-2-[4-氧代-5-(2,2,2-三氟-乙基)-4,5-二氢-1H-吡 唑并[4,3-c][1,6]二氮杂萘-7-基]-苯磺酰胺

化合物编号20：7-(3-氯-2-羟基-苯基)-5-(2,2,2-三氟-乙基)-1,5-二氢-吡 唑并[4,3-c][1,6]二氮杂萘-4-酮

化合物编号21：7-[2-(2-吡咯烷-1-基-乙氧基)-苯基]-5-(2,2,2-三氟-乙 基)-1,5-二氢-吡唑并[4,3-c][1,6]二氮杂萘-4-酮

化合物编号22：N-{2-[4-氧代-5-(2,2,2-三氟-乙基)-4,5-二氢-1H-吡唑并 [4,3-c][1,6]二氮杂萘-7-基]-苯基}-甲磺酰胺

化合物编号23：7-(3-吡唑-1-基-苯基)-5-(2,2,2-三氟-乙基)-1,5-二氢-吡 唑并[4,3-c][1,6]二氮杂萘-4-酮

化合物编号24：7-(6-氯-2-甲基-吡啶-3-基)-5-(2,2,2-三氟-乙基)-1,5-二 氢-吡唑并[4,3-c][1,6]二氮杂萘-4-酮

化合物编号25：N-异丙基-4-[4-氧代-5-(2,2,2-三氟-乙基)-4,5-二氢-1H- 吡唑并[4,3-c][1,6]二氮杂萘-7-基]-苯磺酰胺

化合物编号26：7-(2-异丙氧基-吡啶-4-基)-5-(2,2,2-三氟-乙基)-1,5-二 氢-吡唑并[4,3-c][1,6]二氮杂萘-4-酮

化合物编号27：7-(5-甲氧基-吡啶-3-基)-5-(2,2,2-三氟-乙基)-1,5-二氢- 吡唑并[4,3-c][1,6]二氮杂萘-4-酮

化合物编号28：7-(2-乙氧基-吡啶-3-基)-5-(2,2,2-三氟-乙基)-1,5-二氢- 吡唑并[4,3-c][1,6]二氮杂萘-4-酮

化合物编号29：N,N-二甲基-2-[4-氧代-5-(2,2,2-三氟-乙基)-4,5-二氢 -1H-吡唑并[4,3-c][1,6]二氮杂萘-7-基]-苯磺酰胺

化合物编号30：N-乙基-4-[4-氧代-5-(2,2,2-三氟-乙基)-4,5-二氢-1H-吡 唑并[4,3-c][1,6]二氮杂萘-7-基]-苯磺酰胺

化合物编号31：7-[6-(4-甲基-哌嗪-1-基)-吡啶-3-基]-5-(2,2,2-三氟-乙 基)-1,5-二氢-吡唑并[4,3-c][1,6]二氮杂萘-4-酮

化合物编号32：7-(2-吗啉-4-基-苯基)-5-(2,2,2-三氟-乙基)-1,5-二氢-吡 唑并[4,3-c][1,6]二氮杂萘-4-酮

化合物编号33：7-(2-吡咯烷-1-基-吡啶-3-基)-5-(2,2,2-三氟-乙基)-1,5- 二氢-吡唑并[4,3-c][1,6]二氮杂萘-4-酮

化合物编号34：7-(2-[1,4]二氮杂环庚-1-基-吡啶-3-基)-5-(2,2,2-三氟-乙 基)-1,5-二氢-吡唑并[4,3-c][1,6]二氮杂萘-4-酮

化合物编号35：7-[2-(乙基-甲基-氨基)-吡啶-3-基]-5-(2,2,2-三氟-乙 基)-1,5-二氢-吡唑并[4,3-c][1,6]二氮杂萘-4-酮

化合物编号36：7-(2-氟-吡啶-3-基)-5-(2,2,2-三氟-乙基)-1,5-二氢-吡唑 并[4,3-c][1,6]二氮杂萘-4-酮

化合物编号37：7-(2-氯-吡啶-3-基)-5-(2,2,2-三氟-乙基)-1,5-二氢-吡唑 并[4,3-c][1,5]二氮杂萘-4-酮

化合物编号38：7-吡啶-2-基-5-(2,2,2-三氟-乙基)-1,5-二氢-吡唑并 [4,3-c][1,5]二氮杂萘-4-酮

化合物编号39：7-吡啶-4-基-5-(2,2,2-三氟-乙基)-1,5-二氢-吡唑并 [4,3-c][1,5]二氮杂萘-4-酮

化合物编号40：7-[2-(4-甲基-哌嗪-1-基)-吡啶-4-基]-5-(2,2,2-三氟-乙 基)-1,5-二氢-吡唑并[4,3-c][1,5]二氮杂萘-4-酮

化合物编号41：3-[4-氧代-5-(2,2,2-三氟-乙基)-4,5-二氢-1H-吡唑并 [4,3-c][1,5]二氮杂萘-7-基]-吡啶-2-甲酸甲酯

化合物编号42：7-(6-氨基-吡啶-2-基)-5-(2,2,2-三氟-乙基)-1,5-二氢-吡 唑并[4,3-c][1,5]二氮杂萘-4-酮

化合物编号43：7-(2-二甲基氨基-苯基)-5-(2,2,2-三氟-乙基)-1,5-二氢- 吡唑并[4,3-c][1,5]二氮杂萘-4-酮

化合物编号44：5-(2,2,2-三氟-乙基)-7-(3-三氟甲基-吡啶-2-基)-1,5-二 氢-吡唑并[4,3-c][1,5]二氮杂萘-4-酮

化合物编号45：5-(2,2,2-三氟-乙基)-7-(5-三氟甲基-吡啶-2-基)-1,5-二 氢-吡唑并[4,3-c][1,5]二氮杂萘-4-酮

化合物编号46：3-[4-氧代-5-(2,2,2-三氟-乙基)-4,5-二氢-1H-吡唑并 [4,3-c][1,5]二氮杂萘-7-基]-吡啶-2-甲腈

化合物编号47：7-(2-环丙基氨基甲基-苯基)-5-(2,2,2-三氟-乙基)-1,5-二 氢-吡唑并[4,3-c][1,5]二氮杂萘-4-酮

化合物编号48：7-(4-环戊基-嘧啶-5-基)-5-(2,2,2-三氟-乙基)-1,5-二氢- 吡唑并[4,3-c][1,5]二氮杂萘-4-酮

化合物编号49：7-(5-氯-2-甲氧基-吡啶-3-基)-5-(2,2,2-三氟-乙基)-1,5- 二氢-吡唑并[4,3-c][1,5]二氮杂萘-4-酮

化合物编号50：7-(3-甲基氨基甲基-吡啶-2-基)-5-(2,2,2-三氟-乙 基)-1,5-二氢-吡唑并[4,3-c][1,5]二氮杂萘-4-酮

化合物编号51：7-(4-异丙基-嘧啶-5-基)-5-(2,2,2-三氟-乙基)-1,5-二氢- 吡唑并[4,3-c][1,5]二氮杂萘-4-酮

化合物编号52：7-(5-氯-吡啶-2-基)-5-(2,2,2-三氟-乙基)-1,5-二氢-吡唑 并[4,3-c][1,5]二氮杂萘-4-酮

化合物编号53：7-(3-氯-吡啶-2-基)-5-(2,2,2-三氟-乙基)-1,5-二氢-吡唑 并[4,3-c][1,5]二氮杂萘-4-酮

化合物编号54：7-(2-氨基-6-甲基-嘧啶-4-基)-5-(2,2,2-三氟-乙基)-1,5- 二氢-吡唑并[4,3-c][1,5]二氮杂萘-4-酮

化合物编号55：7-(2-氨基-苯基)-5-(2,2,2-三氟-乙基)-1,5-二氢-吡唑并 [4,3-c][1,5]二氮杂萘-4-酮

化合物编号56：5-(2,2,2-三氟-乙基)-7-(4-三氟甲基-苯基)-1,5-二氢-吡 唑并[4,3-c][1,5]二氮杂萘-4-酮

化合物编号57：7-[2-(2-羟基-乙基)-苯基]-5-(2,2,2-三氟-乙基)-1,5-二氢 -吡唑并[4,3-c][1,5]二氮杂萘-4-酮

化合物编号58：2-[4-氧代-5-(2,2,2-三氟-乙基)-4,5-二氢-1H-吡唑并 [4,3-c][1,5]二氮杂萘-7-基]-吡啶-3-甲腈

化合物编号59：7-(6-甲基-嘧啶-4-基)-5-(2,2,2-三氟-乙基)-1,5-二氢-吡 唑并[4,3-c][1,5]二氮杂萘-4-酮

化合物编号60：5-(2,2,2-三氟-乙基)-7-(6-三氟甲基-吡啶-3-基)-1,5-二 氢-吡唑并[4,3-c][1,5]二氮杂萘-4-酮

化合物编号61：7-(3-氨基-吡啶-4-基)-5-(2,2,2-三氟-乙基)-1,5-二氢-吡 唑并[4,3-c][1,5]二氮杂萘-4-酮

化合物编号62：N-{2-[4-氧代-5-(2,2,2-三氟-乙基)-4,5-二氢-1H-吡唑并 [4,3-c][1,5]二氮杂萘-7-基]-苯基}-丁酰胺

化合物编号63：7-(4-环己基-嘧啶-5-基)-5-(2,2,2-三氟-乙基)-1,5-二氢- 吡唑并[4,3-c][1,5]二氮杂萘-4-酮

化合物编号64：N-{2-[4-氧代-5-(2,2,2-三氟-乙基)-4,5-二氢-1H-吡唑并 [4,3-c][1,5]二氮杂萘-7-基]-苯基}-异丁酰胺

化合物编号65：7-(2-乙酰基-苯基)-5-(2,2,2-三氟-乙基)-1,5-二氢-吡唑 并[4,3-c][1,5]二氮杂萘-4-酮

化合物编号66：7-[4-(环丙基羰基)苯基]-5-(2,2,2-三氟乙基)-1,5-二氢 -4H-吡唑并[4,3-c][1,5]二氮杂萘-4-酮

化合物编号67：7-吡啶-3-基-5-(2,2,2-三氟-乙基)-1,5-二氢-吡唑并 [4,3-c][1,5]二氮杂萘-4-酮

化合物编号68：3-[4-氧代-5-(2,2,2-三氟-乙基)-4,5-二氢-1H-吡唑并 [4,3-c][1,5]二氮杂萘-7-基]-吡啶-2-甲酸。

在下文中，保护基PG为这样的基团：一方面可在合成期间保护反应性 官能团诸如羟基或氨而另一方面在合成结束时允许完整恢复该反应性官能 团。保护基以及保护和脱保护的方法的实例于“ProtectivegroupsinOrganic Synthesis”，Greene等，第四版(JohnWiley&Sons,Inc.,NewYork)中给出。

在下文中，离去基团LG为可通过断开异裂键并且电子对离开而容易地 自分子裂解的基团。该基团可因此例如在取代反应中容易地被另一基团所替 代。该离去基团为，例如，卤素或活化的羟基诸如甲磺酸酯、苯磺酸酯、对 甲苯磺酯、三氟甲磺酸酯、乙酸酯等。离去基团的实例以及制备它们的参考 文献于“AdvancedOrganicChemistry”，J.March，第三版，WileyInterscience， 第310-316页中给出。

根据本发明，通式(I)化合物可根据以下方法制备。

除非另外提及，R1和R2如前所定义。

方案1：制备式(VI)的吡唑并二氮杂萘二酮中间体

其中X、Y、R1和PG如上文所定义，Ra表示氯或溴原子，式(II)、(IV)、 (V)和(VI)的化合物分别包括：

-其中X表示氮原子、Y表示CH且Rb表示碘原子的式(IIa)、(IVa)、 (Va)和(VIa)的化合物，和

-其中X表示CH、Y表示氮原子且Rb表示氯、溴或碘原子的式(IIb)、 (IVb)、(Vb)和(VIb)的化合物。

方案1显示了从Ra为氯或溴且Rb为碘的式(IIa)的氨基-吡啶或者从Ra 为氯或溴且Rb为氯或溴或碘的式(IIb)的氨基-吡啶合成式(VI)化合物的化学 路线。氨基-吡啶(II)与在吡唑上包含保护基(其在碱性介质诸如SEM或THP 中稳定)的式(III)的酰氟在碱诸如tBuOK或NaH的存在下在溶剂诸如THF 或DMF中于室温反应，得到式(IV)的酰胺。式(IV)的酰胺可与亲电子基团 R1-LG(其中LG为良好的离去基团，诸如卤素或三氟甲磺酸酯)在碱诸如NaH、 tBuOK的存在下于惰性溶剂诸如DMF或MeTHF中于室温或者通过加热至 80℃而烷基化。相对于它们的O-烷基异构体，主要得到的是式(Va)和(Vb) 的N-烷基化合物，然后参与以钯(例如Pd(PPh₃)₄)催化的分子内Heck反应， 该反应在弱碱诸如三乙胺或乙酸钠或乙酸钾的存在下于溶剂诸如DMF或 NMP中并同时加热至60至120℃进行，分别得到受保护的式(VIa)的1,5-二 氢-4H-吡唑并[4,3-c][1,6]二氮杂萘-4-酮和式(VIb)的1,5-二氢-4H-吡唑并 [4,3-c][1,5]二氮杂萘-4-酮。

方案2(路线A)：从式(VI)的中间体制备式(I)化合物

其中X、Y、R1、Ra和PG如上文所定义。

式(VI)的卤化衍生物可与硼酸或硼酸酯或者与锡衍生物参与以钯例如 PdCl₂(dppf)、Pd(PPh₃)₄、Pd(t-Bu₃P)₂催化的有机金属偶联反应，该反应在膦 配体和/或弱碱诸如碳酸铯或碳酸钾的存在或不存在下于溶剂诸如DMF或二 噁烷中进行，或者在水的存在下通过加热至80～150℃进行，得到R2如前文 所述的式(VII)化合物。最后，在式(VII)化合物的吡唑在保护基PG的适当条 件下脱保护之后得到式(I)化合物。例如，当在式(VII)化合物中PG表示SEM 或THP时，在酸性介质例如以TFA或无水稀HCl进行处理可得到式(I)化合 物。

方案3(路线B)：经由式(VIII)的硼酸或硼酸酯制备式(I)化合物的备选方案

其中X、Y、R1、Ra和PG如上文所述且个各Rc表示氢原子，或者两 个Rc各自为碳原子并且连接在一起，并且为未经取代的或者经一个或多个 (C1-C4)烷基取代。

根据方案1描述的方法得到的式(VI)的卤化衍生物可经由以例如 Pd(dba)₂，与二硼烷衍生物如双(频哪醇合)二硼，在碱诸如乙酸钾的存在下和 在膦配体的存在或不存在下钯催化的偶联反应，转化成式(VIII)的硼酸或硼 酸酯。式(VIII)的硼酸或硼酸酯可与携带离去基团E诸如卤素原子如氯、溴 或碘或三氟甲磺酸酯的芳香族或杂芳香族取代基R2参与钯催化的Suzuki偶 联反应，得到式(VII)化合物，其可制备如前所述的式(I)化合物。

当R2为取代有一个卤素原子的芳基或杂芳基时，卤素原子可以在存在 或不存在钯(0)或铜(I)催化剂时、在存在或不存在碱时被伯胺或仲胺取代，得 到其中R2为被NR₆R_6’或杂环基取代的芳基或杂芳基的化合物。

在方案1-3中，起始化合物和试剂，当没有描述它们的制备方法时，为 市售可获得的或在文献中描述的，或者可根据本文描述或者本领域技术人员 已知的方法制备。

根据另一方面，本发明的主题还为式(IV)化合物。这些化合物可用作合 成式(I)化合物的中间体。

根据另一方面，本发明的主题还为式(V)化合物。这些化合物可用作合 成式(I)化合物的中间体。

根据另一方面，本发明的主题还为式(VI)化合物。这些化合物可用作合 成式(I)化合物的中间体。

根据另一方面，本发明的主题还为式(VII)化合物。这些化合物可用作 合成式(I)化合物的中间体。

根据另一方面，本发明的主题还为式(VIII)化合物。这些化合物可用作 合成式(I)化合物的中间体。

以下实施例描述某些本发明化合物的制备。实施例为非限制性的，但仅 用于阐述本发明。下文表格阐述了许多本发明化合物的化学结构和物理性质。

使用以下缩写和实验式：

EtOAc乙酸乙酯

DCM二氯甲烷

DMFN,N-二甲基甲酰胺

DMSO二甲基亚砜

HCl氯化氢

HPLC高效液相色谱

LCMS液相色谱/质谱

MeOH甲醇

MeTHF2-甲基四氢呋喃

MHz兆赫

NaCl氯化钠

NaHCO₃碳酸氢钠

Na₂SO₄硫酸钠

NMPN-甲基-2-吡咯烷酮

PdCl₂(dppf)[1,1’-双(二苯基膦基)二茂铁]二氯化钯(II)

Pd(PPh₃)₄四(三苯基膦)钯(0)

Pd(OAc)₂乙酸钯(II)

Pd(t-Bu₃P)₂双(三叔丁基膦)钯(0)

Pd(dba)₂双(二亚苄基丙酮)钯(0)

tBuOK叔丁醇钾

TFA三氟乙酸

THF四氢呋喃

THP四氢吡喃基

SEM2-(三甲基甲硅烷基)乙氧基]甲基

℃摄氏度

min分钟

mL毫升

mmol毫摩尔

ppm百万分之一

在下文中：

-质子磁共振谱(¹HNMR)，如下所述，在400MHz或500MHz在 DMSO-d₆中记录，使用DMSO-d₆峰作为参照。化学位移δ以百万分之一(ppm) 表示。观察到的信号如下表示：s＝单峰；d＝双重峰；t＝三重峰；m＝多 重峰或br.s.＝宽单峰；

-LCMS特征，如下所述，相继显示所用并于以下详述的高效液相色谱 分析方法(A-E)，通过质谱识别的[MH⁺]峰和以分钟表示的化合物的保留时间 (RT)。

*方法A

仪器：1100型(Agilent)或Alliance(Waters)的HPLC系列；MSD型(Agilent) 或ZQ型(Waters)简易四级质谱仪

柱：SymmetryC183.5μm(2.1x50mm)Waters

溶剂A：H₂O+0.005％TFA；溶剂B：CH₃CN+0.005％TFA

流速：0.4mL/min

梯度A/B：100/0(t0min)至0/100(t10min)至0/100(t15min)

检测：UV220nm

离子化：电喷雾正模式ESI+

*方法B

仪器：UPLCAcquity系列(Waters)；SQD质谱(Waters)

柱：BEHC18(2.1x50mm)1.7μm(Waters)；柱温：55℃

溶剂A：H₂O+0.02％HCOOH；溶剂B：CH₃CN+0.02％HCOOH

流速：1mL/min

梯度A/B：98/2(t0min)至2/98(t4min)至2/98(t4.5min)

检测：UV220nm

离子化：电喷雾正模式ESI+

*方法C

仪器：1100型(Agilent)或Alliance(Waters)的HPLC系列；MSD型(Agilent) 或ZQ型(Waters)简易四级质谱仪

柱：LunaC18(2)-HSTPhenomenex(30x2mm)2.5μm；柱温：50℃

溶剂A：H₂O+0.05％TFA；溶剂B：CH₃CN+0.035％TFA

流速：1mL/min

梯度A/B：100/0(t0min)至0/100(t2.5min)至0/100(t3.5min)

检测：UV220nm

离子化：电喷雾正模式ESI+

*方法D

仪器：WatersUPLC

柱：BEHC18(2.1x50mm)1.7μm

溶剂A：H₂O+0.05％HCO₂H；溶剂B：CH₃CN+0.035％HCO₂H

流速：0.9mL/min

梯度A/B：95/5(t0min)至5/95(t1.1min)至5/95(t1.7min)

检测：220nM

离子化：电喷雾正模式ESI+

*方法E

仪器：WatersUPLC

柱：WatersXBridgeC18(4.6x50mm)2.5μm

溶剂A：H₂O+0.1％HCO₂H；溶剂B：CH₃CN+0.08％HCO₂H

梯度A/B：97/3(t0min)至40/60(t3.5min)至2/98(t4min)至2/98(t5min)

检测：220nM

离子化：电喷雾正模式ESI+

实施例1：7-(2-氯吡啶-3-基)-5-(2,2,2-三氟乙基)-1,5-二氢-4H-吡唑并 [4,3-c][1,6]二氮杂萘-4-酮盐酸盐(化合物编号1)

步骤1.1.N-(2-氯-5-碘吡啶-4-基)-1-(四氢-2H-吡喃-2-基)-1H-吡唑-4-甲 酰胺

1-(四氢-2H-吡喃-2-基)-1H-吡唑-4-甲酰氟[CAS号848818-60-0](8.99g, 35mmol)添加至2-氯-4-氨基-5-碘吡啶[CAS号800402-12-4](7.0g,35mmol) 和t-BuOK(3.96g,35mmol)在180ml无水THF中的溶液中，于0℃和氮气 下搅拌20min。反应混合物于环境温度搅拌3h，然后倒入NaHCO₃水溶液 中并以EtOAc萃取。有机相以水洗涤，然后以饱和NaCl水溶液洗涤，经 Na₂SO₄干燥，过滤并浓缩至干。通过硅胶快速色谱(环己烷/EtOAc,梯度： 从90/10至50/50)纯化后，得到3.76g白色粉末(产率：25％)。

LCMS(方法C)：[M+H]⁺＝433.0,RT＝2.17min

步骤1.2.N-(2-氯-5-碘吡啶-4-基)-N-(2,2,2-三氟乙基)-1-(四氢-2H-吡喃 -2-基)-1H-吡唑-4-甲酰胺

t-BuOK(5.60g,50mmol)于环境温度在氮气下分份添加至N-(2-氯-5-碘 吡啶-4-基)-1-(四氢-2H-吡喃-2-基)-1H-吡唑-4-甲酰胺(18g,42mmol)在200 ml无水MeTHF中的溶液中。反应介质变成黄色。于60℃搅拌混合物30min 后，添加三氟甲磺酸2,2,2-三氟乙基酯(7.2ml,50mmol)。反应混合物于60℃ 搅拌2h，倒入饱和NaHCO₃水溶液中并以EtOAc萃取。有机相以水洗涤， 然后以饱和NaCl水溶液洗涤，经Na₂SO₄干燥，过滤并浓缩至干燥。通过硅 胶快速色谱(环己烷/EtOAc,梯度：80/20至40/60)纯化后，得到13.4g白色 粉末(产率：62％)。

LCMS(方法C)：[M+H]⁺＝514.8,RT＝2.31min

步骤1.3.7-氯-5-(2,2,2-三氟乙基)-1-(四氢-2H-吡喃-2-基)-1,5-二氢-4H- 吡唑并[4,3-c][1,6]二氮杂萘-4-酮

Pd(PPh₃)₄(2.83g,2mmol)在氮气下分份添加至N-(2-氯-5-碘吡啶-4- 基)-N-(2,2,2-三氟乙基)-1-(四氢-2H-吡喃-2-基)-1H-吡唑-4-甲酰胺(6.30g,12 mmol)和乙酸钾(3.0g,31mmol)在150ml无水DMF中的溶液中，并且该溶 液已经加热至100℃。反应混合物于100℃搅拌2h，冷却，浓缩至干。残余 物溶解于EtOAc中并且溶液以饱和NaHCO₃水溶液洗涤。有机相以水洗涤， 然后以饱和NaCl水溶液洗涤，经Na₂SO₄干燥，过滤并浓缩至干。通过硅胶 快速色谱(环己烷/丙酮,梯度：90/10至70/30)纯化后，得到2.70g白色粉末(产 率：56％)。

LCMS(方法C)：[M+H]⁺＝387.0,RT＝2.30min

步骤1.4.7-(2-氯吡啶-3-基)-1-(四氢-2H-吡喃-2-基)-5-(2,2,2-三氟乙 基)-1,5-二氢-4H-吡唑并[4,3-c][1,6]二氮杂萘-4-酮

在氮气下将7-氯-5-(2,2,2-三氟乙基)-1-(四氢-2H-吡喃-2-基)-1,5-二氢 -4H-吡唑并[4,3-c][1,6]二氮杂萘-4-酮(30mg,0.08mmol)、2-氯-3-吡啶基硼酸 (30mg/0.16mmol)、Pd(PPh₃)₄(20mg,0.02mmol)、碳酸钾(0.60g,0.19mmol)、 0.8ml二噁烷和0.2ml水相继引入微波反应器中。将反应器密封并且反应混 合物在微波中于120℃加热25min。将反应介质冷却，浓缩至干，吸收在 EtOAc中并倒入饱和NaHCO₃水溶液中。有机相以水洗涤，然后以饱和NaCl 水溶液洗涤，经Na₂SO₄干燥，过滤并浓缩至干。通过硅胶快速色谱(环己烷 /DCM,梯度：80/20至60/40)纯化后，得到10mg白色粉末(产率：24％)。

LCMS(方法C)：[M+H]⁺＝464.0,RT＝2.28min

步骤1.5.7-(2-氯吡啶-3-基)-5-(2,2,2-三氟乙基)-1,5-二氢-4H-吡唑并 [4,3-c][1,6]二氮杂萘-4-酮盐酸盐

无水氯化氢在二噁烷(0.23ml,0.91mmol)中的4M溶液添加至7-(2-氯 吡啶-3-基)-1-(四氢-2H-吡喃-2-基)-5-(2,2,2-三氟乙基)-1,5-二氢-4H-吡唑并 [4,3-c][1,6]二氮杂萘-4-酮(40mg,0.09mmol)在3mlDCM中的溶液中。于环 境温度搅拌16h后，滤出形成的析出物。所得到的固体吸收在二异丙基醚中， 过滤并真空干燥，得到20mg白色粉末(盐酸盐,产率：70％)。

LCMS(方法B)：[M+H]⁺＝380.0,RT＝1.41min

¹H-NMR[(CD₃)₂SO,400MHz]：9.46(1H,s)；8.61(1H,s)；8.56(1H,dd)； 8.12(1H,s)；8.08(1H,dd)；7.63(1H,dd)；5.42–5.30(2H,q)；4.61(1H,brs)

实施例2：7-(2-氯吡啶-3-基)-5-(2,2,2-三氟乙基)-1,5-二氢-4H-吡唑并 [4,3-c][1,5]二氮杂萘-4-酮盐酸盐(化合物编号37)

步骤2.1.N-(2,5-二氯吡啶-3-基)-1-(四氢-2H-吡喃-2-基)-1H-吡唑-4-甲 酰胺

该产物根据步骤1.1中描述的方法使用4-氨基-2,5-二氯吡啶[CAS号 78607-32-6]得到。通过硅胶快速色谱(环己烷/EtOAc,梯度：80/20至50/50) 纯化后，得到白色粉末(产率：23％)。

LCMS(方法B)：[M+H]⁺＝341.0,RT＝1.14min

步骤2.2.N-(2,5-二氯吡啶-3-基)-N-(2,2,2-三氟乙基)-1-(四氢-2H-吡喃 -2-基)-1H-吡唑-4-甲酰胺

三氟甲磺酸2,2,2-三氟乙基酯(1.47ml,10mmol)添加至N-(2,5-二氯吡 啶-3-基)-1-(四氢-2H-吡喃-2-基)-1H-吡唑-4-甲酰胺(2.90g,8.5mmol)和 t-BuOK(1.14g,10mmol)在42ml无水MeTHF中的溶液中，于60℃和氮气 下搅拌20min。反应混合物于60℃加热2h，冷却至环境温度，倒入水中并 以EtOAc萃取。有机相以水洗涤，然后以饱和NaCl水溶液洗涤，经Na₂SO₄干燥，过滤并浓缩至干。通过硅胶快速色谱纯化(环己烷/EtOAc,梯度：从 100/0至80/20)，得到白色粉末形式的产物(产率：20％)。

LCMS(方法A)：[M+H]⁺＝423.0；RT＝8.42min

¹H-NMR[(CD₃)₂SO,250MHz]：8.63(1H,d)；8.51(1H,d)；7.81(1H,s)； 7.05(1H,s)；5.37(1H,dd)；4.71–4.63(2H,m)；3.81–3.56(2H,m)；1.89–1.51 (6H,m)。

步骤2.3.7-氯-5-(2,2,2-三氟乙基)-1-(四氢-2H-吡喃-2-基)-1,5-二氢-4H- 吡唑并[4,3-c][1,5]二氮杂萘-4-酮

在氮气流下将Pd(PPh₃)₄(2.73g,2mmol)添加至N-(2,5-二氯吡啶-3- 基)-N-(2,2,2-三氟乙基)-1-(四氢-2H-吡喃-2-基)-1H-吡唑-4-甲酰胺(5g,12 mmol)和乙酸钾(2.90g,30mmol)在150ml无水DMF中的溶液中，并且该溶 液已经加热至100℃，然后反应混合物在氮气下于100℃搅拌4h。冷却后， 将反应介质浓缩至干，稀释于EtOAc中并倒入饱和NaHCO₃水溶液中。有机 相以水洗涤，然后以饱和NaCl水溶液洗涤，经Na₂SO₄干燥，过滤并浓缩至 干。通过硅胶快速色谱(环己烷/EtOAc,梯度：90/10至70/30)纯化后，得到 3.25g白色粉末(产率：70％)。

LCMS(方法C)：[M+H]⁺＝387.0,RT＝2.45min

步骤2.4.7-(2-氯吡啶-3-基)-1-(四氢-2H-吡喃-2-基)-5-(2,2,2-三氟乙 基)-1,5-二氢-4H-吡唑并[4,3-c][1,5]二氮杂萘-4-酮

在氮气流下将7-氯-5-(2,2,2-三氟乙基)-1-(四氢-2H-吡喃-2-基)-1,5-二氢 -4H-吡唑并[4,3-c][1,5]二氮杂萘-4-酮(0.6g,1.56mmol)、2-氯-3-吡啶基硼酸 (0.29g,1.87mmol)、Pd(t-Bu₃P)₂(0.16g,0.31mmol)、碳酸钾(0.43g,3.12mmol) 和15ml无水DMF相继引入微波反应器中。将反应器密封并且反应混合物 在微波中于120℃加热15min。将反应介质冷却，浓缩至干燥，吸收在EtOAc 中并倒入饱和NaHCO₃水溶液中。有机相以水洗涤，然后以饱和NaCl水溶 液洗涤，经Na₂SO₄干燥，过滤并浓缩至干。通过硅胶快速色谱(环己烷/EtOAc, 梯度：90/10至75/35)纯化后，得到0.20g白色粉末(产率：28％)。

LCMS(方法C)：[M+H]⁺＝464.0,RT＝2.42min

步骤2.5.7-(2-氯吡啶-3-基)-5-(2,2,2-三氟乙基)-1,5-二氢-4H-吡唑并 [4,3-c][1,5]二氮杂萘-4-酮盐酸盐

无水氯化氢在二噁烷(1.53ml,6.12mmol)中的4M溶液添加至7-(2-氯 吡啶-3-基)-1-(四氢-2H-吡喃-2-基)-5-(2,2,2-三氟乙基)-1,5-二氢-4H-吡唑并 [4,3-c][1,5]二氮杂萘-4-酮(0.28g,0.61mmol)在10mlDCM中的溶液。于环境 温度搅拌1h后，滤出所形成的析出物。所得到的固体吸收在二异丙基醚中， 过滤并真空干燥，得到150mg白色粉末(盐酸盐,产率：66％)。

LCMS(方法B)：[M+H]⁺＝380.0,RT＝6.69min

¹H-NMR[(CD₃)₂SO,400MHz]：11.18(1H,s)；8.74(1H,s)；8.56(1H,dd)； 8.46(1H,s)；8.35(1H,s)；8.06(1H,dd)；7.66(1H,dd)；5.33(2H,q)

实施例3：7-(吡啶-2-基)-5-(2,2,2-三氟乙基)-1,5-二氢-4H-吡唑并 [4,3-c][1,5]二氮杂萘-4-酮盐酸盐(化合物编号38)

步骤3.1.7-(吡啶-2-基)-1-(四氢-2H-吡喃-2-基)-5-(2,2,2-三氟乙基)-1,5- 二氢-4H-吡唑并[4,3-c][1,5]二氮杂萘-4-酮

在氩气流下将7-氯-5-(2,2,2-三氟乙基)-1-(四氢-2H-吡喃-2-基)-1,5-二氢 -4H-吡唑并[4,3-c][1,5]二氮杂萘-4-酮(0.19g,0.5mmol)、2-(三丁基甲锡烷基) 吡啶(0.34g,0.7mmol)、Pd(t-Bu₃P)₂(80mg,0.2mmol)和5ml无水DMF相继 引入微波反应器中。将反应器密封并且将反应混合物在微波中于120℃加热 10min，冷却，以EtOAc稀释并倒入水中。有机相以饱和NaCl水溶液洗涤， 经Na₂SO₄干燥，过滤并浓缩至干。通过硅胶快速色谱(环己烷/EtOAc,梯度： 75/25to50/50)纯化后，得到66mg白色粉末(产率：31％)。

LCMS(方法C)：[M+H]⁺＝430.0,RT＝2.37min

步骤3.2.7-(吡啶-2-基)-1-(四氢-2H-吡喃-2-基)-5-(2,2,2-三氟乙基)-1,5- 二氢-4H-吡唑并[4,3-c][1,5]二氮杂萘-4-酮盐酸盐

氯化氢在二噁烷(0.4ml,1.5mmol)中的4M溶液添加至7-(吡啶-2- 基)-1-(四氢-2H-吡喃-2-基)-5-(2,2,2-三氟乙基)-1,5-二氢-4H-吡唑并[4,3-c][1,5] 二氮杂萘-4-酮(0.06g/0.15mmol)在5mlDCM中的溶液。反应介质于环境温 度搅拌2h并过滤。析出物以DCM洗涤并干燥得到白色粉末(盐酸盐；产率： 65％)。

LCMS(方法A)：[M+H]⁺＝346.0,RT＝6.57min

¹H-NMR[(CD₃)₂SO,400MHz]：9.32(1H,s)；8.82(1H,d)；8.76(1H,s)； 8.42(1H,s)；8.33(1H,d)；8.09(1H,m)；7.55(1H,m)；5.78(2H,brs)；5.49– 5.44(2H,q).

实施例4：3-[4-氧代-5-(2,2,2-三氟乙基)-4,5-二氢-1H-吡唑并[4,3-c][1,5] 二氮杂萘-7-基]-吡啶-2-甲酸甲酯盐酸盐(化合物编号41)

步骤4.1.1,5-二氢-1-(四氢-2H-吡喃-2-基)-7-(4,4,5,5-四甲基-1,3,2-二氧 杂硼杂环戊烷-2-基)-5-(2,2,2-三氟乙基)-4H-吡唑并[4,3-c][1,5]二氮杂萘-4-酮

双(频哪醇合)二硼(13.8g,54mmol)和乙酸钾(7.95g,34mmol)在氮气下 添加至7-氯-5-(2,2,2-三氟乙基)-1-(四氢-2H-吡喃-2-基)-1,5-二氢-4H-吡唑并 [4,3-c][1,5]二氮杂萘-4-酮(5.25g,14mmol)在90ml的无水二噁烷中的溶液中。 于70℃搅拌混合物45min后，添加Pd(dba)₂(1.56g,3mmol)和三环己基膦 (1.90g,7mmol)，然后反应介质于70℃加热2h。反应介质倒入水中并以 EtOAc萃取。有机相以饱和NaCl水溶液洗涤，经Na₂SO₄干燥，过滤并浓缩 至干。所得到的残余物以石油醚洗涤以除去过量的双(频哪醇合)二硼，然后 在3-巯基丙基官能化的硅胶(Aldrich)上洗脱。浓缩滤液得到5.05g棕色粉末 (产率：54％)。

LCMS(方法C)：[M+H]⁺＝397.0,RT＝1.97min对应于在该分析的条件 下得到的[4-氧代-1-(四氢-2H-吡喃-2-基)-5-(2,2,2-三氟乙基)-4,5-二氢-1H-吡 唑并[4,3-c][1,5]二氮杂萘-7-基]硼酸。

步骤4.2.3-[4-氧代-1-(四氢-2H-吡喃-2-基)-5-(2,2,2-三氟乙基)-4,5-二氢 -1H-吡唑并[4,3-c][1,5]二氮杂萘-7-基]吡啶-2-甲酸甲酯

和3-[4-氧代-1-(四氢-2H-吡喃-2-基)-5-(2,2,2-三氟乙基)-4,5-二氢-1H-吡 唑并[4,3-c][1,5]二氮杂萘-7-基]吡啶-2-甲酸

在氮气流下将1,5-二氢-1-(四氢-2H-吡喃-2-基)-7-(4,4,5,5-四甲基-1,3,2- 二氧杂硼杂环戊烷-2-基)-5-(2,2,2-三氟乙基)-4H-吡唑并[4,3-c][1,5]二氮杂萘 -4-酮(0.5g,0.92mmol)、3-溴吡啶-2-甲酸甲酯(0.24g,1.10mmol)、碳酸铯 (0.75g,2.30mmol)、PdCl₂(dppf)(0.15g,0.18mmol)、9mlDMF和2.3ml水 相继引入微波反应器中。将反应器密封并且反应混合物在微波中于120℃加 热10min。反应介质浓缩至干并吸收在EtOAc中，并且溶液以水洗涤。

有机相以饱和NaCl水溶液洗涤，经Na₂SO₄干燥,过滤并浓缩至干。 通过硅胶快速色谱(环己烷/EtOAc,梯度：70/30至40/60)纯化后，得到0.17g 的3-[4-氧代-1-(四氢-2H-吡喃-2-基)-5-(2,2,2-三氟乙基)-4,5-二氢-1H-吡唑并 [4,3-c][1,5]二氮杂萘-7-基]吡啶-2-甲酸甲酯，为棕色粉末的形式(产率：37％)。

LCMS(方法C)：[M+H]+＝488.0,RT＝2.22min

通过添加1M盐酸将水相酸化至pH＝3，然后以EtOAc萃取。有机相以 水洗涤，然后以饱和NaCl水溶液洗涤，经Na₂SO₄干燥，过滤并浓缩至干， 得到0.16g3-[4-氧代-1-(四氢-2H-吡喃-2-基)-5-(2,2,2-三氟乙基)-4,5-二氢-1H- 吡唑并[4,3-c][1,5]二氮杂萘-7-基]吡啶-2-甲酸，为米色粉末的形式(产率：36％)。

LCMS(方法C)：[M+H]⁺＝474.0,RT＝1.94min

步骤4.3.3-[4-氧代-5-(2,2,2-三氟乙基)-4,5-二氢-1H-吡唑并[4,3-c][1,5] 二氮杂萘-7-基]吡啶-2-甲酸甲酯盐酸盐

该产物根据在步骤1.5.中描述的方法、使用3-[4-氧代-1-(四氢-2H-吡喃 -2-基)-5-(2,2,2-三氟乙基)-4,5-二氢-1H-吡唑并[4,3-c][1,5]二氮杂萘-7-基]吡啶 -2-甲酸甲酯(0.17g,0.35mmol)得到；得到0.10g白色粉末(盐酸盐,产率： 70％)。

LCMS(方法B)：[M+H]⁺＝404.1,RT＝1.26min

¹H-NMR[(CD₃)₂SO,400MHz]：8.75(1H,dd)；8.58(1H,d)；8.42(1H,s)； 8.31(1H,d)；8.07(1H,dd)；7.80(1H,dd)；5.31(2H,q)；3.69(3H,s)

实施例5：7-[2-(吡咯烷-1-基)吡啶-3-基]-5-(2,2,2-三氟乙基)-1,5-二氢 -4H-吡唑并[4,3-c][1,6]二氮杂萘-4-酮盐酸盐(化合物编号33)

步骤5.1.7-(2-氟吡啶-3-基)-1-(四氢-2H-吡喃-2-基)-5-(2,2,2-三氟乙 基)-1,5-二氢-4H-吡唑并[4,3-c][1,6]二氮杂萘-4-酮

在氮气流下将7-氯-5-(2,2,2-三氟乙基)-1-(四氢-2H-吡喃-2-基)-1,5-二氢 -4H-吡唑并[4,3-c][1,6]二氮杂萘-4-酮(1.5g,3.88mmol)、2-氟-3-吡啶基硼酸 (1.09g,7.76mmol)、Pd(PPh₃)₄(0.90g,0.78mmol)、碳酸铯(3.16g,9.70mmol)、 40ml二噁烷和10ml水相继引入微波反应器中。将反应器密封并且反应混 合物在微波中于120℃加热10min。将反应介质浓缩至干，吸收在EtOAc中 并倒入饱和NaHCO₃水溶液中。有机相以水洗涤，然后以饱和NaCl水溶液 洗涤，经Na₂SO₄干燥，过滤并浓缩至干。通过硅胶快速色谱(DCM/丙酮,梯 度：100/0至96/4)纯化后，得到1.3g白色粉末(产率：75％)。

LCMS(方法C)：[M+H]⁺＝448.0,RT＝2.32min

步骤5.2.7-[2-(吡咯烷-1-基)吡啶-3-基]-1-(四氢-2H-吡喃-2-基)-5-(2,2,2- 三氟乙基)-1,5-二氢-4H-吡唑并[4,3-c][1,6]二氮杂萘-4-酮

将7-(2-氟吡啶-3-基)-1-(四氢-2H-吡喃-2-基)-5-(2,2,2-三氟乙基)-1,5-二 氢-4H-吡唑并[4,3-c][1,6]二氮杂萘-4-酮(0.20g,0.44mmol)和吡咯烷(3.69ml, 43.6mmol)相继引入微波反应器中。将反应器密封并且反应混合物在微波中 于130℃加热40min，冷却并浓缩至干。在胺相(RediSepRfAmine)上 通过快速色谱(环己烷/DCM,梯度：60/40至40/60)纯化残余物后，得到0.21 g米色粉末(产率：98％)。

LCMS(方法C)：[M+H]⁺＝499.1,RT＝1.98min

步骤5.3.7-[2-(吡咯烷-1-基)吡啶-3-基]-5-(2,2,2-三氟乙基)-1,5-二氢 -4H-吡唑并[4,3-c][1,6]二氮杂萘-4-酮盐酸盐

该产物根据步骤1.5中描述的方法使用7-[2-(吡咯烷-1-基)吡啶-3- 基]-1-(四氢-2H-吡喃-2-基)-5-(2,2,2-三氟乙基)-1,5-二氢-4H-吡唑并[4,3-c][1,6] 二氮杂萘-4-酮得到，为米色粉末的形式(2盐酸盐，产率：85％)。

LCMS(方法B)：[M+H]⁺＝415.2,RT＝0.96min

¹H-NMR[(CD₃)₂SO,400MHz]：13-14(1H,brs)；9.45(1H,s)；8.63(1H, s)；8.15(1H,dd)；8.03(1H,d)；7.99(1H,s)；7.10(1H,t)；5.28(2H,q)；3.21 (4H,s)；1.83(4H,s)

以下表格阐明了许多本发明化合物的化学结构和物理性质。在该表中 在“盐”栏中的“/”表示化合物为游离碱形式，而“HCl”代表盐酸盐形式的化合 物和“TFA”代表三氟乙酸盐形式的化合物。

表

本发明化合物进行生化研究以测定它们抑制酶蛋氨酸-氨肽酶2的能力 (对分离的酶进行酶试验)。

MetAP2酶筛选试验

对于酶试验，人类MetAP2蛋白获自感染有重组杆状病毒的昆虫细胞 (sf9)的培养物上清液。

进行实验之前，MetAP2上清液于4℃，在缓冲液(10mMHepes,100mM KCl,10％甘油,pH7.4)中，在最初12小时存在EDTA(1mM)下历时24小时 进行透析。

回收透析上清液并添加作为辅因子的锰至300μM的最终浓度。

酶试验为两步骤程序。

第一步骤中，其在于使本发明化合物、经透析的MetAP2蛋白和底物(由 Neosystem合成的Met-Pro-Arg-pNa肽)接触，其N-末端蛋氨酸可用MetAP2 裂解并且在C末端带有对硝基苯胺(pNa)发色团，其本身可通过另一种肽酶 释放(仅当N末端蛋氨酸已预先裂解时)。

接着，第二步骤在于：使前述步骤裂解的肽与第二肽酶反应以释放发色 团。该第二步骤中所用的肽酶为组织蛋白酶(cathepsin)，其来自TagZyme “DAPase”试剂盒(Quiagen,34366)。

MetAP2活性与释放的对硝基苯胺的量成比例，所述对硝基苯胺的量通 过405nm处的吸收来测量。

对MetAP2的抑制活性以其抑制MetAP2的50％活性的浓度给出。

本发明化合物的IC50值通常小于1.1μM，更具体为1至550nM和甚 至更具体为1至100nM，如下表所示：

为了确定本发明化合物对蛋白质MetAP1的选择性，在分离的酶上实施 了酶试验。该MetAP1重组蛋白在大肠杆菌(Escherichiacoli)中制备。

MetAP1酶试验基于与MetAP2试验相同的原理。

MetAP1活性与释放的对硝基苯胺的量成比例，所述对硝基苯胺的量通 过405nm处的吸收来测量。

本发明化合物在10μM显示无活性。

因此表明，本发明化合物对MetAP2具有选择性抑制活性。

本发明化合物因此可用作MetAP2的抑制剂。

本发明化合物因此可用于制备药物，尤其是作为MetAP2抑制剂的药物。

因此，根据另一方面，本发明的主题为药物，其包含式(I)化合物或其与 药用酸的加成盐。

本发明化合物因此可用于治疗或预防涉及MetAP2抑制剂的病状。

因此，本发明化合物可用于治疗或预防肺和肝纤维化。

本发明化合物也可用于治疗或预防涉及血管生成再活化的病状，诸如糖 尿病性视网膜病变、年龄相关性黄斑变性(ARMD)和银屑病。

本发明化合物也可用于治疗或预防任何具有相当程度血管形成的癌症， 诸如肺癌、乳腺癌、前列腺癌、食管癌、胰腺癌、肝癌、结肠癌或肾癌或诱 导转移瘤的癌症，诸如结肠癌、乳腺癌、肝癌和胃癌、和黑色素瘤。这些化 合物可用于单一疗法或与放疗或化疗结合使用。

本发明化合物也可用于抗肿瘤治疗，单独或与化学治疗结合，或者用于 实体瘤，诸如胰腺肿瘤、乳腺肿瘤、前列腺肿瘤、结肠肿瘤或肾肿瘤、成神 经细胞瘤和卡波西肉瘤(Kaposi’ssarcoma)。

本发明化合物也可用于治疗或预防肝癌、胆管癌以及恶性间皮瘤、胰腺 癌、血管瘤、子宫内膜异位、关节炎且具体为类风湿性关节炎、自身免疫性 疾病、肥胖和微孢子虫病。

根据另一方面，本发明涉及包含作为活性成分的本发明化合物的药物组 合物。这些药物组合物含有有效量的至少一种本发明化合物或所述化合物的 药用盐，以及至少一种药用赋形剂。

所述赋形剂根据药物形式和所需给药模式，选自本领域技术人员已知的 常用赋形剂。

在用于口服、舌下、皮下、肌内、静脉内、外用、局部、气管内、鼻内、 透皮或直肠给药的本发明药物组合物中，以上式(I)的活性成分或其盐可以单 元给药形式，作为与标准药物赋形剂的混合物给药，用于预防或治疗以上病 症或疾病。

适当的单元给药形式包括口服途径形式诸如片剂、软或硬凝胶胶囊、粉 剂、颗粒剂和口服溶液剂或悬浮剂；舌下、口腔、气管内、眼内、鼻内或吸 入给药形式；外用、肠胃外诸如透皮、皮下、肌内或静脉内给药形式；直肠 给药形式和植入物。对于外部施用，本发明化合物可以乳膏剂、凝胶剂、软 膏剂或洗剂使用。

通过举例的方式，呈片剂形式的本发明化合物的单元给药形式可包含以 下组分：

每天给药的活性成分量范围可为0.01至100mg/kg且优选0.02至50 mg/kg，以单次或多次剂量摄入。通常，本发明化合物的日剂量将为能够产 生疗效的化合物最低有效量。

可存在特殊情况，其中更高或更低剂量为适当的；该剂量不偏离本发明 的范围。根据常用实践，适于每位患者的剂量由医生根据给药模式和所述患 者体重和响应来确定。

根据另一方面，本发明还涉及用于治疗上述病状的方法，其包括向患者 给药有效量的本发明化合物或其药用盐。