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Myocardin相关转录因子-A对缺氧缺血诱导的大鼠心肌细胞凋亡的影响

         
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目的 研究Myocardin相关转录因子-A(MRTF-A)对缺氧缺血诱导的心肌细胞凋亡的影响及机制.方法 20只大鼠采用随机数字表分为假手术组和缺血再灌注组.假手术组大鼠实行开胸手术但不构建缺血再灌注模型,缺血再灌注组结扎冠状动脉30min再松开2h建立在体心肌缺血再灌注损伤模型.采用TUNEL法检测心肌细胞凋亡,免疫组化法检测MRTF-A表达;体外培养大鼠原代心肌细胞,转染MRTF-A及小分子mRNA表达质粒并构建缺氧缺血模型.通过流式细胞术检测细胞凋亡率,以Western blot法分析凋亡相关基因bcl-2蛋白表达;采用荧光素酶检测bcl-2转录活性.结果 假手术组和缺血再灌注组的心肌凋亡细胞分别为(8.14±2.33)％和(82.35±7.93)％,缺血再灌注组高于假手术组(P＜0 05).假手术组有少量MRTF-A蛋白表达,缺血再灌注组胞浆中有大量MRTF-A蛋白表达.在体外培养的原代心肌细胞中,对照组、模型组、MRTF-A处理组与MRTF-A抑制组的凋亡率分别为(4.63+2.33)％、(79.97+9.09)％、(43.63+3.52)％和(72.16+5.37)％;bcl-2的蛋白表达分别为0.313+0.014、0.186+0.019、0.254+0.013与0.175+0.017.模型组凋亡率高于对照组(P＜0.01),MRTF-A处理组的凋亡率低于模型组(P＜0.01);MRTF-A抑制组的凋亡率高于MRTF-A处理组(P＜0.05);模型组bcl-2的蛋白低于对照组(P＜0.01),MRTF-A处理组的bcl-2的蛋白高于模型组(P＜0.01);MRTF-A抑制组的bcl-2的蛋白低于MRTF-A处理组(P＜0.05);MRTF-A对bcl-2的转录活性的调控与对照组相比明显升高(P＜0.01),而MRTF-A对突变后的bcl-2的转录活性与对照组比较差异无统计学意义(P＞0.05).结论 缺血再灌注损伤诱导了大鼠心肌细胞凋亡,上调了心肌组织中MRTF-A的蛋白表达;MRTF-A通过上调bcl-2的转录活性表达起到对缺氧缺血诱导的大鼠原代心肌细胞凋亡损伤的保护作用.

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