人血管内皮生长因子受体FLT-1胞外区1-3环cDNA的表达、纯化及鉴定

马骊; 王小宁; 张智清; 周小明; 曾革非; 陈爱君

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目的　研究人血管内皮生长因子受体FLT 1胞外区 1 3环cDNA在酵母菌中的表达、纯化及生物学活性。方法　将编码 316个氨基酸残基的人FLT 1胞外区 1 3环cDNA插入到含AOX1启动子和d分泌信号肽序列的Pichiapastoris酵母载体中 ,构建了重组表达质粒pPICqk/FLT l(1～ 3) ,转化酵母宿主菌GS115 ,筛选His+ Mut表型转化子 ,经摇瓶培养 ,1%甲醇诱导表达。结果　经SDS -PAGE显示 ,表达产物以可溶性分子形式存在于上清中 ,诱导 4天的表达量达到培养上清总蛋白的 6 0 % ,径Westernblot检测抗原性及特异性良好 ,经CM SepharoseFF阳离子交换层析和Sephacryls 10 0分子筛层析 ,纯度达 90 %以上 ;经生物活性检测具有结合hVEGF16 5的能力和hVEGF16 5促进HUVEC的增殖功能。结论　人血管内皮生长因子受体FLT 1胞外区 1～ 3环cDNA在酵母菌中表达成功。

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来源
《中国生物制品学杂志》 |2000年第4期|196-200|共5页
作者
马骊; 王小宁; 张智清; 周小明; 曾革非; 陈爱君;
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作者单位

中国人民解放军第一军医大学分子免疫学研究所;

病毒基因工程国家重点实验室;

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正文语种 chi
中图分类基因的表达;
关键词
血管内皮生长因子; 受体; 酵母; 表达; cDNA; 鉴定;

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