重组核酸酶原核表达载体的构建

赵宇; 陈忠敏

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目的构建重组核酸酶原核表达载体,并检测其表达情况。方法根据Gen Bank公布的黏质沙雷菌胞外核酸酶(Serratia marcescens nuclease,SM nuclease)基因序列(M19495.1),去除其N-端信号肽序列,使用大肠埃希菌偏爱性密码子,设计并合成带有核酸酶基因的Ben-p GH。以核酸酶基因全长为模板,PCR法扩增该基因,将其与经NcoⅠ和XhoⅠ双酶切的A10-p ET-32a-c(+)载体连接,连接产物转入E.coli Top10中,经菌液PCR筛选阳性克隆,并进行DNA测序。将Ben-p ET-32a-c(+)转入E.coli BL21(DE3)中,经IPTG诱导表达,表达产物进行SDS-PAGE鉴定。结果 Ben-p ET-32a-c(+)中核酸酶基因与Gen Bank公布的SM nuclease基因的同源性为82%。表达的重组核酸酶以包涵体形式存在,相对分子质量为30 000,表达量约占菌体总蛋白的84.45%。结论成功构建了重组核酸酶原核表达载体,并获得稳定表达。

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来源
《中国生物制品学杂志》 |2018年第5期|467-472|共6页
作者
赵宇; 陈忠敏;
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作者单位

重庆理工大学药学与生物工程学院;

重庆400054;

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原文格式 PDF
正文语种 chi
中图分类基因载体;
关键词
核酸酶; 原核表达; 质粒;

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