十二指肠贾第虫α-6贾第素的原核表达及纯化

李显赫; 梁金龙; 吴娜; 宫鹏涛; 李建华; 杨举; 李赫; 张西臣

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十二指肠贾第虫α-6贾第素的原核表达及纯化

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目的原核表达并纯化十二指肠贾第虫α-6贾第素(α-6 Giardin)。方法以十二指肠贾第虫的c DNA为模板,PCR扩增α-6 Giardin基因片段,连接至p MD18-T载体,得到重组克隆质粒p MD18-T-α-6,将双酶切后得到的目的片段连接至p ET-28a表达载体中,得到重组表达质粒p ET-28a-α-6,转化至E.coli Rosetta感受态细胞中,IPTG诱导表达目的蛋白α-6 Giardin,收集菌体,离心后进行SDS-PAGE及Western blot鉴定,并利用Ni-NTA亲和层析柱纯化融合的α-6 Giardin蛋白。结果质粒p ET-28a-α-6经双酶切鉴定,证明构建正确;表达的目的蛋白α-6 Giardin为带His标签的包涵体蛋白,相对分子质量约40 000,可与鼠抗His单抗特异性结合,具有良好的反应原性;纯化的重组α-6Giardin融合蛋白相对分子质量约40 000,纯度可达80%。结论成功克隆、表达并纯化了十二指肠贾第虫α-6Giardin蛋白,为十二指肠贾第虫α-6 Giardin进一步的功能研究奠定了基础。

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来源
《中国生物制品学杂志》 |2018年第5期|492-496|共5页
作者
李显赫; 梁金龙; 吴娜; 宫鹏涛; 李建华; 杨举; 李赫; 张西臣;
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作者单位

吉林大学动物医学学院;

吉林长春130062;

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原文格式 PDF
正文语种 chi
中图分类鞭毛虫;基因的表达;
关键词
十二指肠贾第虫; α-6贾第素; 原核表达; 纯化;

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