人用疫苗及生产用细胞中猪圆环病毒PCR检测方法的建立及验证

钱兴丽; 任芳芳; 宋彩花; 段男; 李娅娴; 陈巍; 赵勇; 袁梅; 李亚东; 俞建昆; 杨晓蕾; 洪超

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目的建立人用疫苗及生产用细胞中猪圆环病毒1型(porcine circovirus 1,PCV1)和2型(PCV2)PCR检测方法,并进行验证。方法参照Gen Bank中登录的PCV1(KC447455)和PCV2(AY578327)序列,全基因组合成PCV1和PCV2基因序列,以合成的PCV1和PCV2全基因组序列DNA为模板,进行PCR扩增,对PCR反应中的退火温度进行优化。对优化后的PCR方法进行灵敏度和特异性验证,并用该方法检测疫苗生产用细胞KMB_(17)、Vero工作种子批、脊髓灰质炎减毒活疫苗(oral poliomyelitis vaccine,OPV)收获液、冻干甲型肝炎减毒活疫苗(freeze-dried hepatitis A vaccine,f HAV)成品、肠道病毒71型(enterovirus 71,EV71)灭活疫苗收获液及成品、Sabin株脊髓灰质炎灭活疫苗(inactivated poliomyelitis vaccine prepared with Sabin strain,SIPV)收获液及成品的PCV1和PCV2。结果优化后的退火温度为63℃,建立的PCR方法最低可检测出10^(-1)fg/μL的目的基因,仅对PCV基因组DNA能扩增出特异性条带。用该方法检测生产用细胞KMB_(17)及Vero工作种子批、OPV收获液、f HAV成品、EV71灭活疫苗收获液及成品、SIPV收获液及成品,均未检出PCV1和PCV2。结论成功建立了生产用细胞种子、疫苗收获液及成品中PCV的PCR检测方法,该方法具有较高的灵敏度和较强的特异性,能够用于本所生物制品生产用细胞种子、疫苗收获液及成品中PCV污染的检测,从而提高生物制品的安全性。

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来源
《中国生物制品学杂志》 |2018年第5期|543-546|共5页
作者
钱兴丽; 任芳芳; 宋彩花; 段男; 李娅娴; 陈巍; 赵勇; 袁梅; 李亚东; 俞建昆; 杨晓蕾; 洪超;
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作者单位

中国医学科学院北京协和医学院医学生物学研究所质量检定室云南省重大传染病疫苗研发重点实验室;

云南昆明650118;

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原文格式 PDF
正文语种 chi
中图分类免疫学技术、设备及实验方法;
关键词
疫苗; 细胞; 猪圆环病毒; 聚合酶链式反应;

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