生物反应器培养Vero细胞和H1N1流感病毒

周健; 李国良; 宋绍辉; 欧阳圣洁; 刘泽; 戴永娟; 廖国阳; 李卫东

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生物反应器培养Vero细胞和H1N1流感病毒

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目的建立利用生物反应器制备Vero细胞流感H1N1全病毒灭活疫苗的新工艺。方法利用Vero细胞作为流感病毒增殖的细胞基质,分别以无血清培养液Pro VERO和含血清DMEM培养液,利用5 g/L微载体cytodex-1在3 L硅化生物反应器中进行培养,培养温度(37±0.5)℃,溶解氧(50±20)%,p H 7.2±0.2,搅拌速度(50±20)r/min,待细胞在微载体上长成单层后,以0.1 MOI接种流感病毒Vero细胞高产适应株H1N1/JD/Va,将收获的病毒液经Sepharose 4FF和Capto Q两级纯化,灭活后制备疫苗原液及成品,按照《中国药典》三部(2015版)方法对其进行检定。结果使用无血清细胞培养液培养Vero细胞24 h贴壁率约83%,含血清细胞培养液培养24 h贴壁率为112%;灌流培养方式培养至第6天时,细胞均长至单层,无血清细胞培养液最终细胞数达到(133.4±2.0)×10~4个/m L,含血清细胞培养液最终细胞数达到(353.4±5.9)×10~4个/m L。无血清病毒维持液培养,第66 h收获病毒液血凝效价为388,单位细胞产毒比例为2.9;含血清病毒维持液培养,第66 h收获病毒液血凝效价为891,单位细胞产毒比例为2.5。用含血清细胞培养液培养Vero细胞接种病毒,收获病毒液制备的疫苗原液及成品经检测,各项指标均符合《中国药典》三部(2015版)相关要求。结论建立了3 L生物反应器含血清细胞培养液培养Vero细胞和H1N1流感病毒的新工艺,为进一步放大生产规模奠定了基础。

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来源
《中国生物制品学杂志》 |2018年第5期|547-551|共5页
作者
周健; 李国良; 宋绍辉; 欧阳圣洁; 刘泽; 戴永娟; 廖国阳; 李卫东;
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作者单位

中国医学科学院北京协和医学院医学生物学研究所;

云南昆明650118;

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正文语种 chi
中图分类免疫学技术、设备及实验方法;
关键词
生物反应器; Vero细胞; 微载体; H1N1流感病毒;

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