改良原代大鼠骨源间充质干细胞的体外培养方法及鉴定

刘海琴; 马华根; 唐元瑜

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改良原代大鼠骨源间充质干细胞的体外培养方法及鉴定

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目的改良原代大鼠骨源间充质干细胞体外分离培养方法,以获得纯度高、增殖活力强、分化潜能大的理想工程细胞。方法基于“仿原位生态培养”方法及原理,剪取大鼠前后肢股骨、胫骨,剔除附着的肌肉、筋膜组织,完全不用冲洗骨髓腔,直接将其剪碎成约1 mm^(3)骨块后,移入0.1%Ⅱ型胶原酶中消化90 min;经洗涤、离心后,接种于培养皿中进行原代培养。当细胞融合度达80%~90%时,予0.25%胰蛋白酶消化液进行二次消化,按1:3比例进行传代培养。采用流式细胞仪检测第4代细胞表面CD分子标志物,并进行成脂、成骨诱导分化实验。结果接种48 h后,少量长梭形细胞从骨块周围爬出;96 h后,细胞逐渐融合成片;传至第4代时,细胞形态均一,以“成纤维样”细长梭形为主,融合后呈“涡旋式”生长,具有一定方向性;传至第10代,细胞形态仍基本保持不变。流式细胞仪检测结果提示CD44、CD90和CD29表达阳性,CD34、CD11b/c和CD45呈阴性表达;成脂、成骨诱导分化实验均为阳性。结论基于“仿原位生态培养”原理,采用组织块结合酶消化法,能够简单、高效分离培养出大鼠骨源间充质干细胞,值得推广。

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来源
《中国组织化学与细胞化学杂志》 |2022年第1期|61-67|共7页
作者
刘海琴; 马华根; 唐元瑜;
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作者单位

福建中医药大学中西医结合学院;

北京中医药大学中医学院;

福建中医药大学中医学院;

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原文格式 PDF
正文语种 chi
中图分类 R-311;
关键词
骨; 间充质干细胞; 原代培养; 仿原位生态培养; 组织块结合酶消化法; 免疫表型; 细胞分化;

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