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山羊INSIG1基因超表达对乳腺上皮细胞中脂质合成的影响

         
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本研究旨在通过构建西农萨能奶山羊胰岛素诱导基因1 (INSIG1)的重组腺病毒(Adenovirus,Ad)超表达载体,研究该基因超表达后对乳腺上皮细胞中脂质合成的影响,从而为该基因在山羊乳腺脂质合成调控中的功能研究奠定基础.根据GenBank(登录号:JQ665439)中山羊INSIG1基因序列设计引物,PCR扩增得到其CDS区序列.将目的基因连接到穿梭载体pAdTrack-CMV后获得pAdTrack-CMV-INSIG1质粒,将该质粒Pine Ⅰ线性化后转入大肠杆菌BJ5183感受态细胞进行同源重组,获得pAdEasy-INSIG1重组腺病毒超表达载体.该重组质粒经Pac Ⅰ线性化后转染293A细胞进行病毒的包装及扩繁,利用LaSRT法测定其滴度.将获得的重组腺病毒Ad-INSIG1感染山羊原代乳腺上皮细胞,利用实时荧光定量PCR检测INSIG1及脂质合成相关基因的mRNA表达情况,利用GPO-Trinder酶学反应检测细胞中甘油三酯的含量.结果表明,成功构建了奶山羊INSIG1基因重组腺病毒超表达载体,获得了具有较高滴度(2×108 U·mL-i)的超表达腺病毒Ad-INSIG1;Ad-INSIG1感染山羊原代乳腺上皮细胞48 h后,与Ad-GFP组相比,INSIG1基因的mRNA表达量上调约500倍,固醇调节元件结合蛋白1(SREBP1)和SREBP裂解活化蛋白(SCAP)的mRNA表达量无明显变化,参与脂肪酸从头合成(ACCα、FASN)及去饱和(SCD1)基因的mRNA表达量均显著下降(P＜0.05);参与甘油三酯合成的3个关键基因中,GPAM及DGA T2的mRNA表达量显著下降(P＜0.05),AGPA T6的表达无显著变化;同时,催化甘油三酯分解(ATGL)的基因mRNA表达量也显著下降(P＜0.05);细胞内甘油三酯含量无显著变化.综上所述,在山羊原代乳腺上皮细胞中,INSIG1能够抑制脂质合成相关基因的表达,对山羊乳腺脂质合成具有调控作用.

著录项

  • 来源
    《畜牧兽医学报》 |2016年第9期|1806-1816|共11页
  • 作者

    王苗; 罗军; 许会芬; 朱江江; 赫秋亚; 姚大为; 史怀平;

  • 作者单位

    西北农林科技大学动物科技学院,陕西省农业分子生物学重点实验室,杨凌712100;

    西北农林科技大学动物科技学院,陕西省农业分子生物学重点实验室,杨凌712100;

    西北农林科技大学动物科技学院,陕西省农业分子生物学重点实验室,杨凌712100;

    西北农林科技大学动物科技学院,陕西省农业分子生物学重点实验室,杨凌712100;

    西北农林科技大学动物科技学院,陕西省农业分子生物学重点实验室,杨凌712100;

    西北农林科技大学动物科技学院,陕西省农业分子生物学重点实验室,杨凌712100;

    西北农林科技大学动物科技学院,陕西省农业分子生物学重点实验室,杨凌712100;

  • 原文格式 PDF
  • 正文语种 chi
  • 中图分类 山羊;生物技术遗传育种;
  • 关键词

    山羊乳腺上皮细胞; 胰岛素诱导基因1 (INSIG1); 超表达; 脂质合成;

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